"Временные методические указания по определению пиретроидов (перметрина, циперметрина, фенвалерата и декаметрина) в молоке и мясе животных методом газожидкостной хроматографии"

Утверждены

Министерством здравоохранения СССР

29 июля 1991 г. N 6093-91

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПИРЕТРОИДОВ (ПЕРМЕТРИНА, ЦИПЕРМЕТРИНА,

ФЕНВАЛЕРАТА И ДЕКАМЕТРИНА) В МОЛОКЕ И МЯСЕ ЖИВОТНЫХ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

(Дополнение N 2473-81 от 22 октября 1981 г.)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика пестицидов

1.1. Перметрин (анометрин Н, амбуш, стомозан, мухотоксин, персан, корсар, пермасект) - 3-феноксибензил-(1RS)-цис,транс-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат.

//\ //\

Cl H H // \ // \

\C=C───┴────┴── C-O-CH -│ ││-O-│ ││

/ │ \ / ││ 2 \\ / \\ /

Cl H \/ O \\/ \\/

CH /\CH

3 3

Эмпирическая формула C H Cl O .

21 20 2 3

М.м. 391,28.

В чистом виде в зависимости от соотношения изомеров - вязкая

жидкость, воскообразная масса или кристаллы со слабым запахом и

температурой плавления 34 - 39 °C. Температура кипения 200 °C при

0,01 мм рт. ст. (1,3 Па) и 220 °C при 6,05 мм рт. ст., давление

-7

паров - 3,7 - 4,5 х 10 мм, летучесть - 0,007 мг/куб. м,

показатель преломления - ПД - 1,5627, плотность - 1,190 - 1,272

г/куб. см при 20 °C. Растворимость в воде - 1 - 10 мг/л, гексане и

этиленгликоле - до 30 г/л. Хорошо растворим в метаноле, этаноле,

циклогексане, ацетоне, хлороформе, диэтиловом эфире. Быстрее

гидролизуется в щелочной и сильнокислой среде.

ЛД в зависимости от препаративной формы - 450 - 4000 мг/кг,

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе -

0,002 мг/куб. м, в воде водоемов - 0,05 мг/л. Нормативы МДУ в

продуктах питания находятся в стадии утверждения.

1.2. Циперметрин (цинометрин, фендона, цимбуш, альфаметрин,

эктомин, ренигейд, беррикейд, фастак) - 3-фенокси-(R,S)-2-

цианобензил-(1R,S)-цис,транс-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-диметилцикло-

пропанкарбоксилат.

Cl\ H H

C=C──┴────┴─── C --O--CH-- // \ --O-- // \

Cl/ │ \ / ││ │ │ ││ │ ││

H \/ O CN \\ / \\ /

CH CH

3 3

Эмпирическая формула C H O NCl .

22 19 3 2

М.м. 416,30.

Чистое вещество в зависимости от соотношения изомеров -

вязкая жидкость, воскообразная масса или кристаллы. Температура

плавления 1R цис S + 1S цис R изомеров - 80,5 °C. Давление паров

-6 -9

1,29 х 10 - 1,3 х 10 мм рт. ст. при 20 °C. Плотность 1,12

г/куб. см при 20 °C. Растворимость в воде - 0,5 - 1, гексане -

142, ксилоле - 315 мг/л. Хорошо растворим в низкомолекулярных

кетонах, спиртах, хлорсодержащих углеводах. Гидролизуется в

щелочной среде.

ЛД в зависимости от препаративной формы 79 - 5000 мг/кг.

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе

- 0,0005 мг/куб. м, в воде водоемов - 0,03 мг/л.

Нормативы МДУ в продуктах питания находятся в стадии

утверждения.

1.3. Фенвалерат (сумицидин, бельмарк, OM S-200) -

3-фенокси-(R,S)-цианобензил-(R,S)-2-(4-хлорфенил)-3-метилбутират.

--- --- ---

Cl_// \\___CH__C __O__CH__// \\__O__// \\

\ ___ / / ││ ││ \ ___ / \ ___ /

--- CH O CN --- ---

CH CH

3 3

Эмпирическая формула C H O NCl.

25 22 3

М.м. 419,91.

Кристаллы с температурой плавления 23 °C. Давление паров -

-7

2,3 х 10 мм рт. ст. В воде не растворим. Растворим в гексане.

Хорошо растворим в ацетоне, ксилоле и низкомолекулярных

одноатомных спиртах. Гидролизуется в щелочной среде.

ЛД при оральном введении для крыс 451 мг/кг, ОБУВ в воздухе

рабочей зоны - 0,3 мг/куб. м, в атмосферном воздухе - 0,0003 мг/

куб. м, в воде водоемов - 0,03 мг/л.

1.4. Декаметрин (дельтаметрин, децис, к-отрин, бутокс) -

3-фенокси-(S)-а-цианобензил-(1R,3R)-цис,-3-(2,2-дибромвинил)-2,2-

диметилциклопропанкарбоксилат.

CH CH

3\/ 3

Br H /\ O

\ │ / \ ││ / \\ // \

C=C──┬───────┬──C -O-CH- ││ │──O──│ ││

/ H H │ \ // \\ /

Br CN

Эмпирическая формула C H O Br .

22 19 3 2

М.м. 505,21.

Белое кристаллическое вещество без запаха с температурой плавления 98 - 101 °C. Давление паров 1,5 х 10-8 мм рт. ст. при 25 °C. В воде не растворим, в этаноле - 16, ксилоле - 250, этилацетате - 350 и ацетоне - 500 г/л. Термически устойчив. Гидролизуется в щелочной среде.

ЛД - 67 мг/кг. ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,1 мг/куб. м,

в атмосферном воздухе - 0,0001 мг/куб. м, в воде водоемов - 0,005

мг/л.

2. Методика определения пиретроидов

методом газожидкостной хроматографии в молоке и мясе

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении пиретроидов из молока и мяса ацетоном или его 85-процентным раствором с последующей переэкстракцией в смесь гексана с диэтиловым эфиром и концентрировании экстракта. Идентификация (по временам удерживания) и количественное определение (по сумме изомеров) осуществляются на газовом хроматографе с детектором по захвату электронов. Специальную очистку экстрактов в системе гексан - ацетонитрил проводят при значительном содержании жира в пробах, а адсорбционно-хроматографическую на колонке с силикагелем при повышенном загрязнении проб фоновыми хлорорганическими соединениями и продуктами их трансформации.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество: перметрина - 0,5; циперметрина - 0,2; фенвалерата - 0,5; декаметрина - 0,5 нг.

Нижний предел определения в молоке и мясе: перметрина - 0,01; циперметрина - 0,005; фенвалерата - 0,01; декаметрина - 0,01 мг/кг/л.

Доверительные интервалы среднего значения при p = 0,95 и n = 6:

а) в молоке для перметрина - 58 +/- 9,8, циперметрина - 8,1 +/- 9,8; фенвалерата - 78 +/- 10,5 и декаметрина - 74 +/- 10,4%;

б) в мясе для перметрина - 53 +/- 10,8; циперметрина - 76 +/- 10,8; фенвалерата - 78 +/- 11,0 и декаметрина - 72 +/- 11,7%.

2.1.3. Избирательность метода

Фосфор- и хлорорганические пестициды не мешают определению.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон ч, ГОСТ 2603-79.

н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78.

Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-87.

Диэтиловый эфир хч, ГОСТ 6265-79.

Натрий сернокислый безводный, ГОСТ 4166-76.

Бутиловый эфир уксусной кислоты ч, ГОСТ 22300-76.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Насадка 30% OV-17 на инертоне-супер (0,125 - 0,160 мм) (ЧССР).

Силикагель, 0,1 - 0,4 мм (ЧССР).

Этиловый спирт - ректификат, ГОСТ 5962-67.

Раствор ацетона 85% водный.

Смесь гексана с диэтиловым эфиром в объемном соотношении 1:1.

Стандартный раствор пиретроидов в гексане с содержанием 1 нг в 1 мкл (срок хранения 1 год при герметичной упаковке).

2.3. Приборы и посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-11081-83.

Фарфоровые выпарительные чашки, ГОСТ 9147-80, на 25 и 100 мл.

Воронки делительные, ГОСТ 25336-82, на 100 и 250 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82, ТУ 25-11-917-76.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов - тип "Цвет", "Газохром" и др.

Колбы конические, ГОСТ 25336-82, на 300 мл.

Микрошприц МШ-10М, ТУ 2.833.106.

Воронка фильтрующая ЕФ-1-20-ПОР-100, ГОСТ 25336-82.

Пипетки на 1 мл, ГОСТ 20292-74.

Мясорубка хозяйственная.

Холодильник бытовой.

Центрифуга типа ЦЛР-1.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Подготовка газохроматографической колонки

Стеклянную колонку длиной 500 мм с внутренним диаметром 3 мм заполняют одним из принятых способов готовой набивкой инертон-супер с 3% OV-17. Колонку кондиционируют при 260 °C, продувая газ-носитель со скоростью 60 мл/мин. в течение 8 часов.

2.4.2. Отбор и подготовка проб

Отбор проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды" (N 2051-79, утверждены Минздравом СССР 21.08.79).

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Молоко. В колбу с притертой пробкой объемом не менее 300 мл заливают 50 мл молока анализируемой пробы и 150 мл ацетона. Содержимое интенсивно перемешивают, встряхивая колбу не менее 5 минут, и помещают в холодильник при температуре 0 - +3 °C на 6 - 24 часа. Затем нерастворенные компоненты молока отделяют от ацетонового раствора центрифугированием или фильтрованием. Осадок размельчают с помощью размельчителя тканей или шпателем в 25 мл 85-процентного ацетона и переносят в колбу, использованную для первоначальной экстракции. В эту же колбу приливают еще 75 мл 85-процентного ацетона, которым предварительно обмывают оборудование, примененное для размельчения осадка. Колбу с содержимым встряхивают в течение 10 минут и помещают в холодильник на 2 часа. Ацетоновый раствор отделяют от нерастворенных компонентов фильтрованием или центрифугированием. Ацетоновые экстракты объединяют, добавляют 10 мл бутилового эфира уксусной кислоты и испаряют ацетон из экстракта на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. Отгонку после испарения ацетона сразу же прекращают, не допуская испарения воды и бутилового эфира уксусной кислоты. Остаток экстракта переносят в делительную воронку, приливают 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1) и экстрагируют пиретроиды, встряхивая воронку в течение 5 минут. Слоям дают разделиться. При медленном разделении слоев добавляют при легком встряхивании 5 - 10 мл этилового спирта. Нижний слой сливают в другую делительную воронку и повторяют экстракцию 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1). Гексанэфирную фракцию объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, переносят в выпарительную чашку и испаряют досуха под тягой в вытяжном шкафу. Экстракт периодически подливают так, чтобы его количество за все время испарения не превышало одной трети общего объема чашки. Допускается подогрев экстракта до 30 °C, чем удается предотвратить конденсацию воды на стенках чашек и ускорить испарение растворителей.

Мясо. Пробы предварительно пропускают через мясорубку или размельчают ножницами. Отбирают навеску 25 г и гомогенизируют в 25 мл 85-процентного водного раствора ацетона. К гомогенату приливают еще 50 мл раствора ацетона, встряхивают или перемешивают в течение 10 минут и помещают в холодильник при температуре 0 - +3 °C на 6 - 24 часа. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении пиретроидов в молоке. Сухой остаток экстрактов из молока или мяса растворяют в 1 мл бутилового эфира уксусной кислоты. В испаритель вводят 2 - 6 мкл этого раствора.

Если полученные экстракты оказались недостаточно чистыми, что получается при значительном содержании жира или фоновых хлорорганических пестицидов в пробе, и количественное определение пиретроидов затруднено, проводят очистку с ацетонитрилом и (или) на колонке с силикагелем. Для этого конечные экстракты переносят в выпарительные чашки и испаряют досуха.

2.5.2. Очистка экстракта

Очистка с ацетонитрилом. К сухому остатку для его набухания приливают 1 мл ацетона и через 2 - 3 минуты 5 мл гексана. Покачивая чашку, тщательно обмывают ее поверхность и сливают раствор в делительную воронку. Чашку еще раз обмывают 5 мл гексана и сливают раствор в ту же воронку. Приливают 10 мл ацетонитрила и интенсивно встряхивают 2 минуты. Слоям дают разделиться. Нижний (ацетонитрильный) слой сливают в другую воронку. А из гексанового раствора экстракцию повторяют еще дважды, каждый раз применяя по 5 мл ацетонитрила. К объединенному ацетонитрильному раствору приливают 40 мл дистиллированной воды и 30 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1). Встряхивают воронку в течение 2 минут. Слоям дают разделиться. Нижний слой сливают в другую воронку, приливают 30 мл той смеси и экстракцию повторяют. Гексанэфирный экстракт объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, переносят в выпарительную чашку и испаряют растворителем досуха.

Очистка на колонке с силикагелем. Очистку экстракта проводят на специальном устройстве (см. рис. - не приводится). Для его подготовки пробирку отсоединяют. В воронку засыпают 4,0 - 4,5 куб. см силикагеля, приливают 5 мл гексана, тщательно перемешивают содержимое стеклянной глазной палочкой и, включая вакуум, отсасывают гексан из воронки в колбу. Силикагель дополнительно промывают 10 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1) порциями по 5 мл и в заключение - 5 мл гексана. После этого колонка готова к работе.

Сухой остаток экстракта смывают с выпарительной чашки 15 мл гексана порциями по 5 мл. Каждую порцию смыва (5 мл) сливают в воронку устройства и перемешивают с силикагелем в течение 3 минут. Не прекращая перемешивания, включают вакуум и медленно по каплям отсасывают гексан в колбу. Так поступают с каждой порцией смыва. Силикагель промывают 20 мл гексана порциями по 5 мл. Но в этом случае гексан полностью из колонки не удаляют. Как только мениск гексана достигает верхнего уровня силикагеля, вакуум отключают, добавляют следующую порцию растворителя, слегка помешивая стеклянной палочкой, выравнивают слой силикагеля, а затем включают вакуум. Так поступают и с последней порцией растворителя. Затем с помощью резиновой муфты закрепляют пробирку, вводя в нее стебель воронки. Пиретроиды элюируют 12 мл смеси диэтилового эфира с гексаном (1:1), постоянно подливая смесь, и полностью отсасывают элюат в пробирку. Элюат переносят в выпарительную чашку и испаряют почти досуха. Остаток растворяют в 1 мл бутилового эфира уксусной кислоты. В испаритель хроматографа вводят 2 - 6 мкл этого раствора.

2.5.3. Условия хроматографирования

а) хроматограф "Цвет-106" с детектором по захвату электронов.

Стеклянная колонка размером 500 x 2 мм с насадкой инертон-супер

(0,125 - 0,160 мм) с 3% OV-17. Температурные режимы: термостат

колонки - 250, испарителя - 280 и детектора - 270 °C. Скорость

газа-носителя (азота) - 28 мл/мин., на продувку детектора - 120

-10

мг/мин. Шкала электрометра - 1 x 10 А. Скорость протяжки ленты

- 200 мм/час. Линейный диапазон детектирования - 0,2 - 10 нг.

Абсолютное время удерживания: перметрина - 2,52 мин., циперметрина

- 3,20 мин., фенвалерата - 4,66 мин., декаметрина - 6,33 мин.

б) хроматограф "Цвет-550" с детектором постоянной скорости

рекомбинации. Стеклянная колонка размером 500 x 3 мм с насадкой

инертон-супер (0,125 - 0,160 мм) с 3% OV-17. Температурные режимы:

термостат колонки - 260, испарителя - 270, детектора - 280 °C.

Скорость газа-носителя (азота) - 60 мл/мин. Шкала электрометра -

-9

8 x 10 . Скорость протяжки ленты самописца - 200 мм/час. Диапазон

определяемых концентраций 0,2 - 10 нг. Абсолютное время

удерживания: перметрина - 2,14, циперметрина - 3,05, фенвалерата -

4,42 и декаметрина - 6,88 мин.

В качестве альтернативной может быть использована стеклянная колонка размером 500 x 3 мм с насадкой хроматон N-AW-HDMC (0,125 - 0,160 мм) с 5% SE-30.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом сравнения со стандартом по площади пика анализируемого соединения в пробе и известном количестве стандарта. Площадь пика находят одним из общепринятых методов. Содержание пиретроидов в анализируемом материале (C) в мг/кг (л) находят по формуле:

S x C x V x 100

р ст

C = ------------------,

S x V x P x K

ст а

где:

S - площадь пика анализируемой пробы, кв. мм;

S - площадь пика стандарта, кв. мм;

ст

C - содержание пиретроидов в стандарте, нг;

ст

V - объем раствора, из которого отбирают аликвоту для

инъекции, мл;

V - объем аликвоты, которую вводят в хроматограф, мкл;

P - навеска или объем анализируемого образца, г или мл;

K - процент определения.

3. Требования безопасности

Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе с легковоспламеняющимися растворителями, взрывоопасными и высокотоксичными веществами.