"Методические указания по определению комманда в бобовых хроматографическими методами"

Утверждены

Минздравом СССР

8 июня 1989 г. N 5006-89

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КОММАНДА В БОБОВЫХ

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

Краткая характеристика препарата. Комманд - гербицид

избирательного действия, эффективное средство для борьбы со

злаковыми двудольными сорняками. Действующее вещество

2-(2-хлорфенил)метил-4,4-диметил-3-изоксазолидинон. Брутто-формула

C H ClNO . Молекулярная масса 239,7. Общепринятое название -

12 14 2

кломазон. Светло-коричневая вязкая жидкость с запахом рыбы,

-2

плотность 1,192 при 20 °C, давление паров 1,92 x 10 Па при 25

°C. Хорошо растворим в хлороформе, гептане, ацетоне, гексане,

метаноле, ацетонитриле, диоксане, хлористом метилене и других

органических растворителях. Растворимость в воде 1,1 г/л;

коэффициент распределения в системе октанол - вода 350. Устойчив

при хранении: при комнатной температуре может храниться без потерь

в течение года, при 50 °C - в течение 3 мес. Препаративная форма -

концентрат эмульсии, содержащий 480 г/л д.в. Норма расхода на сое

0,75 - 1,0 кг/га по д.в.

Принцип метода. Метод основан на экстракции комманда из пробы органическим растворителем (н-гексан) с последующим определением методом ГЖХ или ТСХ.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 16.

Таблица 16

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОММАНДА

┌────────────────────────────────────────┬──────────────────────────┬─────┐

│ Параметры │ ГЖХ │ ТСХ │

│ ├─────────────┬────────────┤ │

│ │ вариант I │ вариант II │ │

├────────────────────────────────────────┼─────────────┼────────────┼─────┤

│Нижний предел определения, мг/кг │0,005 │0,005 │0,05 │

│Среднее значение определения, % │82,6 │81,5 │81,0 │

│Стандартное отклонение, +/- % │18,6 │13,6 │14,6 │

│Доверительный интервал среднего, +/- % │23,6 │16,9 │18,2 │

└────────────────────────────────────────┴─────────────┴────────────┴─────┘

Избирательность метода. Метод избирателен в присутствии загрязнителей окружающей среды: хлорпроизводных циклопарафинов (изомеров ГХЦГ), соединений дифенилметанового ряда (ДДТ и его производных).

Реактивы и растворы. Азот газообразный особой чистоты. Аммиак водный 25-процентный ч.д.а. Ацетон х.ч. н-Гексан ч., перегнанный. Сульфат натрия безводный ч. (прокаленный). Нитрат серебра х.ч.

Проявляющий реагент. В мерную колбу на 100 мл помещают 0,5 г нитрата серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 - 10 мл водного 25-процентного аммиака. Полученный раствор разбавляют ацетоном до 100 мл. Хранят в склянке темного стекла с притертой пробкой. Годен в течение 1 мес.

Носитель инертный: хроматон N-AW-HMDS (0,125 - 160 мм). Насадка готовая: хроматон N-AW-DMCS (0,125 - 0,16 мм), содержащий 5% SE-30. Фазы неподвижные: фенилметилсиликоновое масло OV-17, трифторпропилметилсиликоновый каучук OF-1. Стандартный раствор комманда в н-гексане с концентрацией 100 мкг/мл.

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания. Баня водяная.

Испаритель ротационный вакуумный. Мельница электрическая.

Облучатель ртутно-кварцевый. Установка компрессорная. Шкаф

сушильный. Воронки химические. Камеры хроматографические. Колбы:

конические на 100 мл, грушевидные на 100 мл, мерные на 100 мл.

Микрошприцы вместимостью 10 мкл, тип МШ-1И. Микропипетки

вместимостью 0,1 мл. Пробирки мерные. Пульверизаторы стеклянные.

Цилиндры мерные. Фильтры "синяя лента". Хроматограф газовый с ДЭЗ

("Цвет-106", "Кристалл-2000" и др.). Колонки хроматографические:

1) длиной 1 м, диаметром 3 мм, содержащая 5% SE-30 на хроматоне

N-AW-DMCS (0,12 - 0,16 мм); 2) длиной 2 м, диаметром 3 мм,

содержащая 1,5% OV-17 + OF-1 на хроматоне N-AW-HMDS (0,125 - 0,160

мм). Спектроденситометр для чтения тонкослойных хроматограмм (типа

"Оптон"). Пластинки хроматографические "Силуфол" УФ размером 20

254

x 20 см.

Ход анализа. Экстракция. Измельченную в порошок на электрической мельнице пробу (10 г) помещают в коническую плоскодонную колбу вместимостью 75 - 100 мл на шлифе, заливают 20 - 25 мл н-гексана и непрерывно перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. После отстаивания экстракт отфильтровывают в грушевидную колбу вместимостью 75 - 100 мл на шлифе через складчатый фильтр "синяя лента", содержащий безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют, экстракты объединяют, пробу количественно переносят на фильтр и, ополоснув коническую колбу н-гексаном, промывают растворителем (5 - 10 мл).

Объединенный экстракт концентрируют на ротационном испарителе под вакуумом при 40 °C до объема 1 - 2 мл. Концентрат тщательно переносят в мерную пробирку и при комнатной температуре упаривают в токе азота особой чистоты до объема 0,1 - 0,2 мл.

Идентификация и количественное определение комманда. При

определении методом ТСХ аликвотные части экстракта (0,01 и 0,1

части конечного объема) наносят при помощи микрошприца или

микропипетки на хроматографическую пластинку "Силуфол" УФ .

254

Рядом с пробой наносят различные количества стандартного раствора

гербицида (по 0,5; 2 и 5 мкг). Пластинку помещают в камеру для

хроматографирования, содержащую подвижную фазу (смесь н-гексана с

ацетоном в соотношении 4:1). Время насыщения камеры 30 мин. После

хроматографирования (длина пробега 15 - 17 см) пластинку

высушивают в горизонтальном положении в вытяжном шкафу до удаления

запаха растворителя, а затем обрабатывают проявляющим реагентом с

помощью пульверизатора, подсоединенного к воздушному компрессору.

Зоны локализации комманда на хроматограммах проявляются после

облучения УФ-светом в виде серо-бурых пятен с величиной R 0,35.

Количество комманда в пробе оценивают визуально или

денситометрически на приборе типа "Оптон". Оставшуюся часть

экстракта при необходимости также подвергают хроматографированию

по описанной методике.

Для идентификации и количественного определения комманда

методом ТСХ могут быть использованы также пластинки

хроматографические: пластинки для ВЭТСХ (СССР), величина R

комманда 0,85; "Силуфол" - 0,35; "Алюграм" (ФРГ) - 0,37;

"Полиграм" (ФРГ) - 0,38; "Кизельгель 60" F (ФРГ) - 0,43.

254

При определении комманда методом ГЖХ анализ 5 мкл конечного гексанового экстракта проводят по одному из двух вариантов.

В варианте I используют хроматографическую колонку длиной 1 м, содержащую 5% SE-30. Температура (°C): колонки - 190, детектора - 230, испарителя - 220. Скорость потока газа-носителя (азота) через колонку 60 мл/мин., скорость потока азота на продувку детектора 160 мл/мин. Время удерживания комманда относительно альдрина 0,48, абсолютное время удерживания 59 с.

В варианте II используют хроматографическую колонку длиной 2 м, содержащую 1,5% OV-17 и 1,95% QF-1. Температура (°C): колонки - 190, детектора - 240, испарителя - 220. Скорость потока газа-носителя (азота) через колонку 50 мл/мин., скорость потока азота на продувку детектора 160 мл/мин. Время удерживания комманда относительно альдрина 0,68, абсолютное время удерживания 5 мин. 40 с.

Дополнительные способы идентификации комманда. Для повышения надежности идентификации комманда в пробе могут быть рекомендованы дополнительные способы или их сочетание.

Перераспределение в системе н-гексан - концентрированная серная кислота. После проведения ГЖХ-анализа по описанной методике к гексановому экстракту в пробирке прибавляют 1 - 2 капли концентрированной серной кислоты. Смесь перемешивают путем встряхивания; после разделения фаз из экстракта, который находится над слоем кислоты, с помощью микрошприца (аккуратно, не касаясь стенок пробирки и кислоты!) отбирают аликвоту (5 мкл) и повторно анализируют в идентичных условиях. Сравнение хроматограмм позволяет вычислить вклад комманда в сигнал детектора. Комманд в результате обработки серной кислотой удаляется из раствора, а ХОП, в том числе и имеющие близкое по величине время удерживания гамма-ГХЦГ, количественно сохраняются.

Капиллярная газожидкостная хроматография. Хроматограф газовый отечественного производства "Кристалл-2000", снабженный диалого-вычислительным комплексом с программным обеспечением и автоматической дозировкой жидких проб. Кварцевая капиллярная хроматографическая колонка длиной 24 м с внутренним диаметром 0,2 мм, неподвижная фаза OV-1. Температура (°C): колонки - 175, испарителя - 250, детектора - 250. Газ-носитель - азот, скорость потока азота на колонку - 30 мл/мин., на поддув детектора - 20 мл/мин. В этих условиях обеспечивается селективность определения комманда в присутствии ХОП, производных циклопарафинов (изомеры ГХЦГ), диенового синтеза (альдрин, гептахлор, дильдрин), дифенилметанового ряда (ДДТ, его 2,4'-изомер и метаболиты), основных компонентов смесей родственных им полихлорированных бифенилов. Время удерживания относительно альдрина 0,81.

Высокоэффективная жидкостная хроматография. Хроматограф жидкостный микроколоночный отечественного производства "Милихром", детектор спектрофотометрический, лямбда = 200 нм. Микроколонка длиной 5 см с внутренним диаметром 2 мм, неподвижная фаза "Силасорб 600", 5 мкм. Элюент гептан или смесь гексана с ацетоном в объемном соотношении 6:1. Скорость элюирования 200 мкл/мин. Поддиапазон чувствительности 3,2 А, время измерения 0,6 с, скорость движения диаграммной ленты 720 мм/ч. В таких условиях достигается избирательность определения в присутствии ХОП. Объем удерживания комманда 295 мкл.

Идентифицировать комманд при газохроматографическом анализе можно с помощью азот-селективного детектора, повышающего предел обнаружения препарата в пробе на порядок по сравнению с ДЭЗ.

Обработка результатов анализа. Содержание комманда в анализируемых объектах (X, мг/кг) при определении методом ТСХ рассчитывают по формуле:

X = ---,

V P

где:

A - количество препарата, обнаруженное в аликвоте экстракта,

взятой для хроматографирования, мкг;

V - объем аликвоты экстракта, нанесенной на

хроматографическую пластинку, мл;

V - конечный объем экстракта, мл;

P - масса пробы, г.

Для количественной оценки результатов, полученных методом ГЖХ,

используют формулу:

H V

х 2

X = ----,

KV P

где:

H - высота хроматографического пика комманда в пробе, мм;

V - объем аликвоты экстракта, введенный в испаритель

хроматографа, мкл;

V - конечный объем экстракта, мл;

P - масса пробы, взятой для анализа, г;

K - калибровочный коэффициент, рассчитанный из результатов

серии анализов стандартного раствора по формуле:

H H H

1 1 2 n

K = - (-- + -- + ... + --),

n CV CV CV

где:

H - высота пика стандартного раствора, мм;

n - число проведенных анализов стандартного раствора;

C - концентрация комманда в стандартном растворе, нг/мкл;

V - объем стандартного раствора, введенный в испаритель хроматографа, мкл.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, концентрированными кислотами.