"Методические указания по определению хлорорганических пестицидов в воде, продуктах питания, кормах и табачных изделиях хроматографией в тонком слое"

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

28 января 1980 г. N 2142-80

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ

В ВОДЕ, ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ТАБАЧНЫХ

ИЗДЕЛИЯХ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ

Данная методика апробирована и рекомендована в качестве официальной группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Настоящие Методические указания распространяются на определение содержания ДДТ, ДДЭ, ДДД, гексохлорана, альдрина, кельтана, гептахлора, метоксихлора, дактала, тедиона и эфирсульфоната в воде, почве, вине, овощах, фруктах, грибах, зерне, комбикормах, корнеклубнеплодах и зеленых кормах, рыбе, мясе, мясопродуктах, внутренних органах, молоке и молочных продуктах, животном жире, сливочном и растительных маслах, жмыхах, шротах, лузге, меде, сахаре, яйцах и яйцепродуктах, а также в табачных изделиях.

1. Характеристика анализируемых пестицидов

Краткая характеристика препаратов представлена в табл. 1.

Таблица 1

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПЕСТИЦИДОВ

┌───┬────────────┬───────────────┬────────────┬──────┬──────────────┬──────────────┐

│ N │ Пестицид │ Химическое │Эмпирическая│ Мол. │Темп., град. C│Растворимость │

│п/п│ │ название │ формула │масса ├───────┬──────┼─────┬────────┤

│ │ │ │ │ │плавле-│кип., │ в │ в орг. │

│ │ │ │ │ │ния │мм рт.│воде │растворе│

│ │ │ │ │ │ │ ст. │ │ │

├───┼────────────┼───────────────┼────────────┼──────┼───────┼──────┼─────┼────────┤

│1. │Альдрин │1,2,3,4,10,10- │C12H8Cl6 │364,92│104 - │ │н │гексан, │

│ │ │гексахлор-1, │ │ │105 │ │ │бензол, │

│ │ │4-эндо-5, │ │ │ │ │ │ацетон, │

│ │ │8-экзо-димети- │ │ │ │ │ │спирты и│

│ │ │лен-1,4,4а,5,8,│ │ │ │ │ │др. │

│ │ │8а-гексагидро- │ │ │ │ │ │ │

│ │ │нафталин │ │ │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│2. │Гексахлоран │1,2,3,4,5,6- │C6H6Cl6 │290,82│ │ │ │ │

│ │ │гексахлорцикло-│ │ │ │ │ │ │

│ │ │гексан │ │ │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│3. │Гексахлор- │1,2,3,4,5,6- │C6Cl6 │264,8 │231 │322 │тр-р │бензол, │

│ │бензол │гексахлорбензол│ │ │ │ │ │спирты, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │четырех-│

│ │ │ │ │ │ │ │ │хлорист.│

│ │ │ │ │ │ │ │ │углерод,│

│ │ │ │ │ │ │ │ │керосин,│

│ │ │ │ │ │ │ │ │бензол │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│4. │Гептахлор │1,4,5,6,7,8- │C10H5Cl7 │373,5 │95 - 96│117 - │н │цикло- │

│ │ │гептахлор-4, │ │ │ │196 │ │гексан, │

│ │ │7-эндо-метилен-│ │ │ │(0,05)│ │ксилол, │

│ │ │3а,4,7,7а-тет- │ │ │ │ │ │четырех-│

│ │ │рагидроинден │ │ │ │ │ │хлор. │

│ │ │ │ │ │ │ │ │углерод,│

│ │ │ │ │ │ │ │ │керосин,│

│ │ │ │ │ │ │ │ │бензол │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│5. │п,п' ДДД │4,4'-дихлорди- │C14H10Cl4 │320,0 │112 │ │н │ацетон, │

│ │ │фенилдихлорме- │ │ │ │ │ │бензол, │

│ │ │тилметан │ │ │ │ │ │гексан и│

│ │ │ │ │ │ │ │ │др. │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│6. │п,п' ДДТ │4,4'-дихлорди- │C14H9Cl5 │354,5 │108,5 -│185 │0,001│ацетон, │

│ │ │фенилтрихлорме-│ │ │109 │(1) │ │бензол, │

│ │ │тилметан │ │ │ │ │ │гексан, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │спирты и│

│ │ │ │ │ │ │ │ │др. │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│7. │п,п' ДДЭ │4,4-дихлорди- │C14H9Cl4 │318,0 │ │ │0,014│ацетон, │

│ │ │фенилдихлорэти-│ │ │ │ │ │гексан, │

│ │ │лен │ │ │ │ │ │бензол │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│8. │Дактал │Диметилтетра- │C10H604Cl4 │332,0 │156 │ │ │ацетон, │

│ │ │хлортерефталат │ │ │ │ │ │гексан, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │бензол, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │хлоро- │

│ │ │ │ │ │ │ │ │форм │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│9. │Кельтан │4,4'-дихлорди- │C14H9OCl5 │370,4 │78,5 - │225 │н │толуол, │

│ │(Хлорэтанол)│фенилтрихлор- │ │ │79 │ │ │хлоро- │

│ │Кетан │метилкарбинол │ │ │ │ │ │форм, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │серный │

│ │ │ │ │ │ │ │ │эфир, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │гексан, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │бензол, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │спирты │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│10.│Метоксихлор │4,4'-диметокси-│C16H15O2Cl3 │345,65│70 - 85│ │тр-р │ацетон, │

│ │ │дифенилтрихлор-│ │ │ │ │ │четырех-│

│ │ │метилметан │ │ │ │ │ │хлорис- │

│ │ │ │ │ │ │ │ │тый уг- │

│ │ │ │ │ │ │ │ │лерод, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │хлоро- │

│ │ │ │ │ │ │ │ │форм, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │бензол и│

│ │ │ │ │ │ │ │ │др. │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│11.│Тедион │4-Хлорфенил- │C12H6O2Cl4S │356,07│146 - │ │0,02 │бензол, │

│ │ │2,4,5-трихлор- │ │ │147 │ │(56) │ксилол, │

│ │ │фенилсульфон │ │ │ │ │ │толуол, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │хлоро- │

│ │ │ │ │ │ │ │ │форм │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ │

│12.│Эфирсульфо- │4-хлорфенил- │C12H8Cl2SO3 │303,06│86,5 │ │н │ацетон, │

│ │нат │4-хлорбензол │ │ │ │ │ │дихлор- │

│ │ │сульфонат │ │ │ │ │ │этан, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │ксилол, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │цикло- │

│ │ │ │ │ │ │ │ │гексан, │

│ │ │ │ │ │ │ │ │четырех-│

│ │ │ │ │ │ │ │ │хлорис- │

│ │ │ │ │ │ │ │ │тый уг- │

│ │ │ │ │ │ │ │ │лерод │

└───┴────────────┴───────────────┴────────────┴──────┴───────┴──────┴─────┴────────┘

2.1. Принцип метода. Метод основан на хроматографии хлорсодержащих пестицидов в тонком слое окиси алюминия, силикагеля или пластинок "Силуфол" в различных системах подвижных растворителей после экстракции их из исследуемых образцов и очистке экстрактов. Подвижным растворителем служит н-гексан или н-гексан в смеси с ацетоном. Места локализации препаратов обнаруживают после опрыскивания пластинок раствором аммиаката серебра с последующим ультрафиолетовым облучением или после облучения ультрафиолетовым светом пластинок "Силуфол", содержащих о-толидин.

2.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 2.

Таблица 2

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ

Диапазон определяемых концентраций 0,005 - 2,0 мг/кг или мг/л

┌─────────────┬──────┬──────┬──────┬───────┬──────┬───────┬──────┐

│Анализируемая│Предел│Число │Размах│Среднее│Стан- │Относи-│Дове- │

│ проба │обна- │парал-│варьи-│значе- │дарт- │тельное│ри- │

│ │руже- │лель- │рова- │ние оп-│ное │стан- │тель- │

│ │ния │ных │ния, %│ределе-│откло-│дартное│ный │

│ │мг/л │опре- │ │ния, % │нение,│откло- │интер-│

│ │или │деле- │ │ │% │нение, │вал │

│ │мг/кг │ний │ │ │ │% │ │

├─────────────┼──────┼──────┼──────┼───────┼──────┼───────┼──────┤

│Вода │0,005 │7 │20 │93 │10 │10,7 │7,7 │

│Вино │0,005 │7 │25 │90 │12 │13,3 │9,0 │

│Овощи │0,05 │7 │20 │83 │12 │14,4 │9,0 │

│Фрукты │0,05 │6 │20 │81 │9 │11,1 │7,4 │

│Зерно │0,05 │7 │25 │75 │10 │13,3 │7,5 │

│Трава │0,025 │10 │30 │74 │12 │16,2 │7,6 │

│Рыба │0,05 │10 │24 │83 │12 │14,4 │7,6 │

│Мясо │0,05 │10 │30 │87 │15 │17,2 │9,5 │

│Животный жир │0,04 │6 │26 │82 │12 │14,6 │9,9 │

│Молоко, слив-│0,04 │13 │30 │86 │16 │18,6 │8,9 │

│ки, творог │ │ │ │ │ │ │ │

│Сливочное │0,05 │8 │30 │83 │17 │20,0 │12,0 │

│масло │ │ │ │ │ │ │ │

│Сахар │0,02 │6 │6 │97 │5 │5,1 │4,1 │

│Почва │0,06 │ │ │70 │9 │ │7,9 │

└─────────────┴──────┴──────┴──────┴───────┴──────┴───────┴──────┘

2.3. Реактивы и растворы

Ацетон хч, ГОСТ 2603-71

Аммиак водный хч, ГОСТ 3760-64

Алюминия окись 2 ст. активности для хроматографии, ч, МРТУ 6-09-5296-68. Просеивают через сито 100 меш.

Алюминия окись, пропитанная серной кислотой. Две весовые части окиси алюминия (или окиси кремния) помещают в фарфоровую ступку, заливают одной объемной частью серной кислоты и тщательно перемешивают. Смесь готовят непосредственно перед подготовкой колонок для очистки экстрактов из проб шротов, жмыха, лузги

Бензол хч, ГОСТ 5955-68

Н-гексан ч, МРТУ 6-09-2937-66

Калий щавелевокислый чда, ГОСТ 5868-68

Кальций сернокислый чда, ГОСТ 3210-66. Просушивают 6 часов в сушильном шкафу при 160 град. C. Просеивают через сито 100 меш.

Кремния окись для люминофоров ч, МРТУ 6-09-4875-67

Натрий сернокислый безводный ч, ГОСТ 4166-66

Натрий углекислый кислый хч, ГОСТ 4201-66, 0,5 н. раствор

Натрий хлористый хч, ГОСТ 4233-66, насыщенный раствор

Петролейный эфир (темп. кип. 40 - 70 град.)

Перекись водорода хч (30% водный раствор), ГОСТ 10929-64

Проявляющие реактивы:

Проявляющий реактив N 1. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл аммиака и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном; в готовый раствор можно добавить 0,2 мл перекиси водорода. Раствор следует хранить в колбе с притертой пробкой в темном месте в течение 3-х дней. На пластинку 9 x 12 см расходуется 8 - 10 мл раствора.

Проявляющий реактив N 2. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл 2-феноксиэтанола и доводят объем раствора до 200 мл ацетоном, затем добавляют 6 капель 30-процентной перекиси водорода.

Серебро азотнокислое чда, ГОСТ 1277-63

Серная кислота ч, ГОСТ 4204-66

Силикагель АСК (Воскресенского химкомбината Московской обл.)

Силикагель КСК, просеянный через сито 100 меш.

Стандартные образцы:

ДДТ, ДДД, ДДЭ, альдрин, изомеры ГХЦГ, гептахлор, метоксихлор, кельтан, эфирсульфонат, дактал, тедион хч.

Стандартные растворы: 10 мг соответствующего пестицида растворяют в мерной колбе на 100 мл в н-гексане и доводят до метки этим растворителем. Стандартные растворы необходимо хранить в стеклянной посуде с притертыми пробками в холодильнике.

Стеклянная вата, очищенная конц. серной кислотой, промытая дистиллированной водой и высушенная

о-Толидин ч, МРТУ 6-09-6337-69, 1% раствор в ацетоне

2-феноксиэтанол

Этиловый спирт, ректификат, ТУ 19-11-39-69

Хлороформ хч, ГОСТ 200-15-74

Четыреххлористый углерод хч, ГОСТ 20228-74

Этиловый эфир (для наркоза), Фармакопея СССР

Натрий сернокислый, 2% водный раствор

Натрий сернокислый, насыщенный раствор

2.4. Приборы и посуда

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76

Вакуумно-ротационный испаритель, ИР ТУ 25-11-310-69 или прибор для отгонки растворителей, МРТУ 25-11-67-67

Воронки химические, диам. 6 см, ГОСТ 86-13-64

Воронки делительные, емкостью 100, 250, 500 мл, ГОСТ 10054-75

Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-69

Гомогенизатор или измельчитель тканей

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70

Камера для хроматографирования, размером 150 x 200, 105 x 165 мм, ГОСТ 10565-63

Колбы Бунзена, ТУ 25-11-135-69

Колбы мерные, емкостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74

Колбы нш, емкостью 100, 250, 500 мл, ГОСТ 10394-63

Колбы круглодонные нш, емкостью 150, 250, 500 мл, ГОСТ 10394-63

Микропипетки, ГОСТ 1770-74 (для нанесения стандартных растворов)

Пипетки или шприцы для нанесения проб

Пипетки емкостью 1, 5, 10 мл, ГОСТ 1770-74

Прибор для встряхивания, МРТУ 2451-64

Пластинки стеклянные 9 x 12, 13 x 18 см

Пульверизаторы стеклянные для опрыскивания пластинок

Сито на 100 меш (диаметр отверстий 0,147 мм)

Стеклянные хроматографические колонки (диаметр - высота), 20 x 400, 15 x 150

Ртутно-кварцевая лампа

Цилиндры мерные емкостью 25, 50, 100, 250, 500 мл, ГОСТ 1770-74

Чашки выпарительные N 3, N 1, ГОСТ 9147-69

Приготовление пластинок для хроматографии

Тщательно промытую хромовой смесью, раствором соды, дистиллированной водой и высушенную пластинку протирают этиловым спиртом или эфиром и покрывают сорбционной массой. Массу готовят следующим образом:

а) 50 г просеянной через сито 100 меш. окиси алюминия смешивают в фарфоровой ступке с 5 г сернокислого кальция, прибавляют 75 мл дистиллированной воды и перемешивают в ступке или колбе до образования однородной массы. На пластинку 9 x 12 см наносят 10 г сорбционной массы (на пластинку 13 x 18 см - 20 г) и, покачивая, равномерно распределяют по всей пластинке. Пластинки сушат при комнатной температуре 18 - 20 часов, можно сушить их 20 минут при комнатной температуре, а затем 45 минут в сушильном шкафу при температуре 110 град. C.

б) 35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100 меш., смешивают с 2 г сернокислого кальция и 90 мл дистиллированной воды и перемешивают в ступке или колбе до однородной массы. Наносят на пластинки и сушат, как указано выше. Порция рассчитана на 10 пластинок.

Если пластинки с тонким слоем силикагеля темнеют после облучения УФ-светом, силикагель перед употреблением следует очистить от примесей. Для этого силикагель заливают на 18 - 20 часов разбавленной соляной кислотой (1:1), кислоту сливают, промывают силикагель водой и кипятят в круглодонной колбе 2 - 3 часа с разбавленной азотной кислотой (1:1), промывают проточной водопроводной, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод, сушат в сушильном шкафу 4 - 6 часов при температуре 130 град. Силикагель дробят и просеивают через сито 100 меш.

Пластинки для хроматографии "Силуфол" UV-254 производства ЧССР перед использованием импрегнируют о-толидином. Для этого каждую пластинку опускают на 0,5 см в 0,1% раствор о-толидина в ацетоне, налитый в камеру для хроматографирования. После того как фронт растворителя поднимется до верхнего края пластинки, ее вынимают и высушивают на воздухе, избегая прямого солнечного света. После этого пластинки готовы к употреблению. Пластинки, импрегнированные о-толидином, хранят в эксикаторе. Используют при анализе кормов.

Пластинки "Силуфол" UV-254 производства ЧССР предварительно промывают дистиллированной водой в хроматографической камере, высушивают на воздухе и непосредственно перед использованием активизируют в сушильном шкафу при температуре 65 град. в течение 4 минут.

Подготовка хроматографических колонок для очистки экстрактов

Хроматографическая колонка для очистки от молочного жира. В нижнюю часть хроматографической колонки (размером 20 x 400 мм) помещают стекловату или 500 мг обезжиренной ваты. Затем засыпают в колонку силикагель АСК (75 мл для очистки экстрактов из проб свиного жира и 70 мл для всех остальных проб) и уплотняют силикагель постукиванием по колонке. Колонку промывают 50 мл н-гексана или петролейного эфира, и прошедший через нее растворитель отбрасывают. После этого колонка готова для хроматографической очистки экстрактов из проб рыбы, мяса и мясопродуктов, молока и молокопродуктов, меда, яиц и т.д.

Хроматографическая колонка для очистки экстрактов из проб шротов (необогащенных липидами) и лузги.

Хроматографическую колонку заполняют на высоту 1 см стеклянной ватой, затем в колонку вносят просеянную окись алюминия (I) слоем 2,5 см или окись кремния - 3,5 см. Далее засыпают, не утрамбовывая, комочки окиси алюминия (кремния), пропитанные серной кислотой, высота слоя (II) 2,5 см. Каждый слой последовательно промывают гексаном (всего 20 - 30 мл).

Для анализа жмыхов и шротов, обогащенных липидами, слои окиси алюминия следует увеличить до 5 см (I) и 3 см (II) соответственно, в случае использования окиси кремния - 6 см (I) и 3 см (II).

2.5. Проведение определения

Вода, вино. 200 мл пробы помещают в делительную воронку и экстрагируют пестициды, встряхивая в течение 3-х минут н-гексаном или петролейным эфиром тремя порциями по 30 мл или диэтиловым эфиром тремя порциями по 50 мл. В объединенные экстракты насыпают 10 г безводного сернокислого натрия или фильтруют через воронку, заполненную на 2/3 сернокислым натрием. Экстракты переносят в прибор для отгонки растворителей и отгоняют растворитель до объема 0,2 - 0,3 мл. В случае необходимости экстракт чистят серной кислотой.

Овощи, фрукты. 20 г измельченной пробы помещают в колбу с притертой пробкой и проводят экстрагирование пестицидов трижды в течение 15 минут на аппарате для встряхивания н-гексаном или петролейным эфиром порциями по 30 мл. Объединенные экстракты сушат безводным сернокислым натрием, переносят в прибор для отгонки растворителей, отгоняют растворитель до объема 0,2 - 0,3 мл и наносят на пластинку.

Зерно, грибы. Из измельченных проб отбирают 20 г зерна, 50 г сырых или 10 г сухих грибов и помещают в колбы с притертыми пробками. Экстракцию пестицидов проводят трижды на приборе для встряхивания н-гексаном или петролейным эфиром порциями по 30 мл. Объединенные экстракты переносят в делительную воронку, прибавляют 10 мл насыщенного раствора безводного сернокислого натрия в серной кислоте и осторожно встряхивают несколько раз. Отделяют органический слой и повторяют обработку до тех пор, пока кислота не станет бесцветной. Экстракт промывают дистиллированной водой, сушат безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель.

Яблоки, капуста, трава, сено. 20 г измельченных яблок, 20 г капусты, 40 г травы и 20 г сена заливают 100 мл ацетона в колбе с притертой пробкой. Встряхивают 2 - 3 минуты, прибавляют 20 мл дистиллированной воды и охлаждают на льду 30 минут. Экстракт сливают и фильтруют холодным, экстракцию повторяют. Из объединенных водно-ацетоновых экстрактов отгоняют ацетон, а из водного остатка экстрагируют препараты н-гексаном тремя порциями по 10 мл в течение 10 минут. Гексановые экстракты очищают серной кислотой, насыщенной безводным сернокислым натрием. Сушат безводным сернокислым натрием. Отгоняют растворитель до небольшого объема и наносят на пластинку. Если очистка неполная (после испарения растворителя на колбе остается белый налет), экстракт испаряют досуха, остаток смывают холодным ацетоном 3 раза порциями по 0,2 мл и сразу наносят на пластинку.

Комбикорма. Для исследования берут навеску 40 г, увлажняют ее в колбе 60 мл дистиллированной воды. Увлажненную навеску оставляют на ночь в колбе, закрытой пробкой. Экстракцию пестицидов проводят дважды 50 - 100 мл смеси гексан - ацетон 1:1 при встряхивании в течение 2 часов. Экстракты объединяют в делительной воронке на 500 мл, прибавляют дважды по 50 мл дистиллированной воды и, после разделения слоев, нижний водный слой сливают в другую делительную воронку и экстрагируют пестициды 40 мл гексана. Водный слой сливают. Гексановые экстракты объединяют, фильтруют через воронку с бумажным фильтром, заполненным на 2/3 безводным сернокислым натрием. Экстракты упаривают на ротационном испарителе до объема 20 - 30 мл или досуха, растворяя затем сухой остаток в 20 - 30 мл гексана или петролейного эфира. Экстракт переносят в делительную воронку и производят очистку серной кислотой, как описано выше.

Шрот, лузга, жмых. Навески: 15 г обогащенного липидами шрота или жмыха; 20 г не обогащенного липидами шрота или лузги делят на равные части и помещают в колбы емкостью 100 - 250 мл с притертыми пробками, заливают гексаном (три объема гексана на одну весовую часть шрота), встряхивают на приборе для встряхивания 30 минут. Экстракт фильтруют через воронку Бюхнера, не перенося осадок на воронку. В колбу повторно заливают указанное количество гексана, встряхивают 30 минут, фильтруют, количественно переносят осадок на воронку Бюхнера с помощью 30 мл гексана (3 раза по 10 мл). Полученный экстракт выпаривают до 30 мл на ротационном испарителе или в токе воздуха при температуре не выше 40 град., остаток делят на две равные части и помещают в морозильную камеру холодильника на 1 час (не менее). Каждую часть пропускают через отдельную колонку с окисью алюминия со скоростью 2 мл/минуту, промывают колбу и колонку 50 мл охлажденной смеси этилового эфира с гексаном (15:85). Эту операцию необходимо проводить без перерыва, не оставляя на следующий день. Очищенные экстракты объединяют и упаривают до объема 1 мл. Остаток из колбы переносят количественно микропипеткой с помощью резиновой груши в пробирку на 1 мл, колбу и микропипетку 2 - 3 раза промывают небольшим количеством гексана (всего 0,3 - 0,5 мл), сливая его в ту же пробирку. Затем осторожно выпаривают гексан из пробирки на водяной бане при температуре 50° почти досуха (конечный объем приблизительно 2 - 3 капли). Если общий объем экстракта и промывной жидкости превышает 1 мл, то сначала выпаривают экстракт, постепенно прибавляя к нему промывную жидкость. При наличии в упаренном экстракте белого мазеобразного осадка в пробирку добавляют 5 - 6 капель гексана и помещают ее на 15 - 20 минут в морозильную камеру холодильника, затем деканируют дважды таким же количеством гексана и снова упаривают до конечного объема 2 - 3 капли.

Параллельно с исследуемыми образцами готовят два модельных экстракта. Каждый экстракт получают из одного грамма шрота, не содержащего пестицидов (соотношение сухого вещества и пестицида то же, что и в исследуемых образцах). В один из экстрактов перед очисткой на колонках вносят микрошприцем (микропипеткой) определяемые пестициды в количестве 3 мкг, в другой - 0,75 мкг. Упаренные исследуемые и модельные экстракты с помощью микропипетки или микрошприца количественно наносят на пластинку, трижды смывая пробирку небольшим количеством гексана.

Рыба, мясо и мясопродукты. Мясо, мясопродукты пропускают через мясорубку. Рыбу очищают от чешуи, внутренних органов и тоже пропускают через мясорубку. 20 г пробы перемешивают с безводным сернокислым натрием и помещают в колбу с притертой пробкой. Пестициды экстрагируют дважды смесью гексан - ацетон или петролейный эфир - ацетон в соотношении 1:1 порциями по 50 мл в течение 1,5 часов при встряхивании. Экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром, заполненным на 2/3 безводным сернокислым натрием, затем растворитель отгоняют, сухой остаток растворяют в 20 мл н-гексана и вносят его в колонку с силикагелем АСК. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110 мл смеси бензола с гексаном в соотношении 3:8 порциями по 25 - 30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу со шлифом емкостью 250 - 300 мл. Через 10 минут после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью груши. Элюат отгоняют до объема 0,1 мл и наносят на хроматографическую пластинку.

В том случае, если пробы мяса или рыбы содержат большое количество жира, после испарения первого экстрагента (смеси ацетона с гексаном) и растворения сухого остатка в гексане следует провести очистку гексанового экстракта серной кислотой, а затем колоночную очистку, как описано выше.

Животный жир, яйца, яичный порошок. Жир измельчают на мясорубке, яичный порошок тщательно перемешивают, яйца - отделяют желток от белка, взвешивают желток и белок, а для анализа берут только желток. Конечный результат о содержании хлорорганических пестицидов в яйце приводят на все яйцо. Желток тщательно перемешивают.

25 г подготовленного образца заливают 50 мл ацетона, перемешивают и нагревают на горячей водяной бане до закипания растворителя. Колбу охлаждают, добавляют в нее 10 мл охлажденного 2% раствора сернокислого натрия, перемешивают и охлаждают 45 минут на ледяной бане. Затем сливают ацетоновый слой в круглодонную колбу через слой обезжиренной ваты. Экстракцию ацетоном с последующим вымораживанием жира повторяют еще два раза. Из объединенных экстрактов отгоняют ацетон на ротационном испарителе или в приборе для отгонки растворителей (температура бани не более 70 град. +/- 2 град.) и трижды экстрагируют петролейным эфиром порциями 20, 10 и 10 мл. Продолжительность первой экстракции 1 час, последующих - 15 минут. Петролейный эфир переносят в делительную воронку с 40 мл 2% водного раствора сернокислого натрия, перемешивают содержимое в течение 2-х минут, дают слоям разделиться и водную фазу отбрасывают. Для улучшения разделения слоев можно добавить несколько мл насыщенного раствора сернокислого натрия. Операцию промывки экстракта повторяют еще два раза, после чего петролейный эфир сливают в стакан с 20 г безводного сернокислого натрия, споласкивают делительную воронку дважды 5 мл петролейного эфира. Подсушенный экстракт количественно переносят в мерный цилиндр на 50 мл и доводят объем раствора петролейным эфиром до 30 мл. Далее наносят 30 мл экстракта в колонку с силикагелем АСК, как указано выше. Для проб свиного жира насыпают 75 мл силикагеля АСК, для всех остальных проб - 70 мл. Очистку экстрактов проводят, как описано для проб мяса. Элюат собирают в круглодонную колбу на 150 мл, растворитель упаривают до объема нескольких капель и наносят на хроматографическую пластинку.

Мед. 30 г меда смешивают с 3 г безводного сернокислого натрия и трижды экстрагируют пестициды гексаном порциями по 30 мл каждый раз по 15 минут, тщательно растирая мед стеклянной палочкой в узком химическом стакане. Экстракты объединяют и отгоняют гексан до объема 30 мл или до меньшего объема, далее доводя экстракт до 30 мл гексаном. 30 мл экстракта вносят в хроматографическую колонку с силикагелем АСК и проводят очистку экстракта и испарение растворителя, как описано выше.

Сахар. Из навески 50 г сахара, предварительно растворенного в воде, пестициды экстрагируют в делительной воронке на 250 мл н-гексаном. Экстракцию пестицидов проводят трижды по 50, 25 и 25 мл растворителя каждый раз встряхивая по 5 минут. Объединенные гексановые экстракты очищают от коэкстрактивных веществ (красящие, аминокислоты, липиды) сернокислотным способом.

Молоко и молочные продукты. Для подготовки проб можно использовать один из приведенных способов.

Первый способ. Сливки, сметана, молоко и др. цельномолочные продукты. Для анализа берут 20 г сливок и сметаны, предварительно разведенных равным объемом дистиллированной воды, 50 мл молока, кефира и т.п., прибавляют концентрированную серную кислоту (30 - 40 мл) до полного почернения пробы. Охлажденный до 10 - 15 град. раствор переносят в делительную воронку и экстрагируют препараты гексаном 2 раза порциями по 25 мл. Для полного извлечения воронку встряхивают 2 минуты, затем оставляют ее на 30 минут до полного разделения слоев. Если образуется эмульсия, прибавляют 1 - 2 мл этилового спирта. К объединенным экстрактам в делительной воронке прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты, насыщенной сернокислым натрием, и осторожно встряхивают несколько раз. Очистку продолжают до получения бесцветной серной кислоты.

Творог, сыр. 50 г творога или 10 г измельченного на терке сыра заливают 40 мл гексана или петролейного эфира, непрерывно встряхивают 2 - 3 минуты и оставляют на 30 минут. Экстракцию повторяют. Объединенные экстракты в делительной воронке очищают серной кислотой, как указано выше.

Второй способ. Молоко, кефир, простокваша, кумыс и другие цельномолочные продукты. 25 мл продукта помещают в делительную воронку на 300 мл, приливают по 5 мл щавелевокислого калия и насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают, приливают 100 мл ацетона, встряхивают 2 минуты. Приливают 100 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют до полного разделения слоев. Верхнюю фазу отбрасывают, а нижнюю выливают в круглодонную колбу со шлифом и испаряют растворитель досуха. Остаток смывают 30 мл гексана.

Сгущенное молоко, 10 - 20% сливки. К 10 г продукта прибавляют 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и выливают в делительную воронку вместимостью 150 мл. К смеси приливают 40 мл ацетона, встряхивают 2 минуты, приливают 60 мл хлороформа, встряхивают 2 - 3 минуты и оставляют до разделения фаз. Далее поступают, как при определении пестицидов в молоке.

Сгущенные молочные продукты. 10 г продукта помещают в стаканчик, заливают 10 мл воды с температурой 45 - 50 град. C, перемешивают и переносят в делительную воронку на 150 мл, добавляют 5 мл щавелевокислого калия. Содержимое воронки перемешивают, приливают 80 мл ацетона и встряхивают 2 - 3 минуты. Добавляют 100 мл хлороформа и встряхивают 5 - 7 минут. После разделения фаз нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу, растворители отгоняют, а сухой остаток растворяют в 30 мл петролейного эфира.

Сухие молочные продукты. 3 г сухих молочных продуктов (сливок 2 г) высыпают в стаканчик, приливают 15 мл дистиллированной воды с температурой 40 - 45 град. C, размешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 300 мл, приливают по 5 мл щавелевокислого калия и насыщенного раствора хлористого натрия. Содержимое воронки перемешивают, добавляют 80 мл ацетона и встряхивают 3 - 5 минут, приливают 100 мл хлороформа, встряхивают 5 минут и оставляют на 3 - 5 минут (до разделения фаз). Нижнюю фазу сливают в круглодонную колбу, растворитель отгоняют, а остаток смывают 30 мл гексана.

Сметана, 30 - 40% сливки. 5 г продукта отвешивают в стаканчик, приливают 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку вместимостью 150 мл. Стаканчик обмывают 40 мл ацетона, смывы переносят в делительную воронку, которую встряхивают 2 - 3 минуты, добавляют 70 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Воронку оставляют на несколько минут до разделения фаз, нижнюю фазу сливают в колбу для отгонки растворителей, растворитель отгоняют, а остаток смывают 30 мл гексана.

Творог, сыр. 10 г творога или измельченного на терке сыра растирают с 10 мл насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку на 250 - 300 мл. Прибавляют 80 мл ацетона, встряхивают 2 минуты, приливают 100 мл хлороформа и вновь встряхивают. Нижнюю фазу используют для анализа после отгонки растворителей, растворив остаток в 30 мл гексана.

Далее проводят очистку экстрактов из проб молока и молочных продуктов от молочного жира, подготовленных по второму способу. Для этого 30 мл экстракта наносят в колонку с 70 мл силикагеля АСК. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110 мл смеси бензола с гексаном в соотношении 3:8 порциями по 25 - 30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу на 250 - 300 мл. Через 10 минут после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью резиновой груши. После очистки растворители отгоняют под вакуумом.

Сливочное масло. 20 г сливочного масла растапливают на водяной бане в круглодонной колбе, прибавляют 50 мл ацетона, тщательно перемешивают до растворения жира, прибавляют 10 мл ледяной дистиллированной воды и охлаждают на льду до затвердевания жира (примерно 30 минут). Сливают ацетоновый экстракт, и процедуру повторяют еще 2 раза. Из объединенных экстрактов в круглодонной колбе ацетон отгоняют на водяной бане. Пестициды экстрагируют из оставшегося водного экстракта гексаном тремя порциями по 10 мл в течение 5 минут. Объединенные гексановые экстракты в делительной воронке обрабатывают серной кислотой с сернокислым натрием. Очищенный экстракт сушат безводным сернокислым натрием и упаривают.

Почва. К навескам воздушно-сухой почвы (10 г), помещенным в конические колбы емкостью 250 мл, приливают 10 мл 1-процентного водного раствора хлористого аммония и оставляют на сутки закрытыми. Затем приливают смесь 30 мл ацетона и 30 мл гексана и встряхивают колбы в течение часа на встряхивающем устройстве. Содержимое колб переносят в центрифужные пробирки. После центрифугирования жидкую часть сливают в конические колбы, почву с помощью 10 мл 1-процентного раствора хлористого аммония и 30 мл ацетона переносят в исходные конические колбы, добавляют 30 мл гексана и проводят экстракцию еще в течение 30 минут. Затем экстракты объединяют. К объединенным экстрактам в делительной воронке приливают 180 мл дистиллированной воды, осторожно встряхивают в течение 5 - 7 минут, дают жидкостям расслоиться и нижний водный слой сливают в коническую колбу. Гексановый слой пропускают через безводный сульфат натрия (столовая ложка или 30 - 40 г сульфата натрия).

Из водно-ацетонового слоя экстракцию пестицидов проводят еще дважды 15 и 10 мл гексана, который затем сушат через тот же сульфат натрия. Гексановые экстракты объединяют.

Концентрирование экстрактов проводят либо на ротационно-вакуумном испарителе, либо при температуре бани не более 40 град. C и времени отгонки 9 - 11 минут, либо из колбочек с г-образным отводом при температуре водяной бани 72 - 75 град. C.

Очистку сконцентрированных гексановых экстрактов из проб почв проводят серной кислотой, как описано выше для других проб, и испаряют растворитель.

Табак и табачные изделия. 5 г табака помещают в стеклянный стакан на 500 мл, заливают 50 мл концентрированной серной кислоты и стеклянной палочкой тщательно размешивают до полного равномерного обугливания пробы. Спустя 10 - 15 минут в колбу добавляют 25 мл гексана, тщательно размешивают содержимое и прибавляют 20 мл четыреххлористого углерода. Экстракцию пестицидов из пробы проводят в течение 15 минут трижды, после чего экстракт последовательно переносят в делительную воронку для однократной или двукратной дополнительной очистки серной кислотой.

Хроматографирование

На хроматографическую пластинку на расстоянии 1,5 см от ее края шприцем или пипеткой наносят исследуемую пробу в одну точку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Остаток экстракта в колбочке смывают тремя порциями (по 0,2 мл) диэтилового эфира, которые наносят в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартные растворы, содержащие 10, 5, 1 мкг исследуемых препаратов (или другие количества, близкие к определяемым концентрациям).

Пластинки с нанесенными растворами помещают в камеру для

хроматографирования, на дно которой за 30 минут до начала

хроматографирования наливают подвижный растворитель. При

использовании пластинок с тонким слоем окиси алюминия или

силикагеля в качестве подвижного растворителя применяют н-гексан

или смесь гексана с ацетоном в соотношении 6:1, для препаратов, у

которых величина R в гексане ниже 0,3. При использовании

пластинок "Силуфол" подвижный растворитель - 1% раствор ацетона в

гексане, а пластинок "Силуфол", импрегнированных о-толидином, -

гексан с диэтиловым эфиром в соотношении 49:1. Край пластинки с

нанесенными растворами может быть погружен в подвижный

растворитель не более чем на 0,5 см.

После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку орошают проявляющим реактивом и подвергают действию УФ света в течение 10 - 15 минут (лампа ПРК-4). Пластинки следует располагать на расстоянии 20 см от источника света.

При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета.

При использовании для анализа пластинок "Силуфол", импрегнированных о-толидином, их непосредственно после хроматографирования подвергают УФ-облучению в течение нескольких минут. При наличии хлорорганических пестицидов в этом случае появляются пятна сине-голубого цвета.

Количественное определение осуществляют сравнением площадей пятен пробы и стандартных растворов. Между количеством препарата в пробе, не превышающим 20 мкг, и площадью его пятна на пластинке существует прямая пропорциональная зависимость. При большем содержании препарата следует использовать пропорциональную часть исследуемого экстракта.

2.6. Обработка результатов анализа

Количество препарата в пробе вычисляют по формуле:

A x S

X = ------,

P x S

где: X - содержание препарата в пробе, мг/кг или мг/л;

A - содержание препарата в стандартном растворе, мкг;

S - площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;

S - площадь пятна пробы, кв. мм;

P - масса или объем исследуемой пробы, г или мл.

3. Требования безопасности

Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами и хлорорганическими пестицидами.

Таблица 3

ВЕЛИЧИНА R ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ

┌─────────────────────┬──────────────────────────┬─────────────────┐

│ Пестицид │ Подвижный растворитель │ Величина R │

│ │ │ f │

│ │ ├────────┬────────┤

│ │ │на окиси│на сили-│

│ │ │алюминия│кагеле │

├─────────────────────┼──────────────────────────┼────────┼────────┤

│Гексахлорбензол │Гексан │0,9 │- │

│Альдрин │Гексан │0,83 │0,68 │

│ДДЭ │-"- │0,78 │0,66 │

│ДДЭ │Гексан + ацетон (6:1) │0,87 │- │

│Гептахлор │Гексан │0,76 │0,65 │

│2,4-ДДТ │-"- │0,67 │0,54 │

│4,4'-ДДТ │-"- │0,61 │0,50 │

│4,4'-ДДТ │Гексан + ацетон (6:1) │0,75 │- │

│Линдан │Гексан │0,34 │0,20 │

│ДДД │-"- │0,30 │0,40 │

│ДДД │Гексан + ацетон (6:1) │0,62 │- │

│Метоксихлор │Гексан │0,15 │- │

│Метоксихлор │Гексан + ацетон (6:1) │0,60 │- │

│Кельтан │Гексан │0,05 │- │

│Кельтан │Гексан + ацетон (6:1) │0,40 │- │

│Кельтан │Бензол │0,44 │- │

│Тедион │Гексан │0,03 │- │

│Тедион │Гексан + ацетон (6:1) │0,55 │- │

│Эфирсульфонат │Гексан │0, │- │

│Эфирсульфонат │Гексан + ацетон (6:1) │0,45 │- │

│Дактал │То же (2:1) │0,9 │- │

└─────────────────────┴──────────────────────────┴────────┴────────┘

В настоящих Методических указаниях обобщены следующие методики определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов в пищевых продуктах:

1. М.А. Клисенко, З.Ф. Юркова Определение ДДТ, ДДЭ, ДДД,

(ВНИИГИНТОКС) альдрина, дильдрина, гептахлора,

Л.А. Стемпковская (Киевский метоксихлора, эфирсульфоната и

НИИ гигиены питания) др. ядохимикатов в воде, продуктах

В.В. Молочников, питания и биологических средах

В.И. Мочалов, хроматографией в тонком слое.

А.П. Моргунова (ВНИИМП) Утвержден 30.07.1973, N 1112-73.

Методические указания по

определению микроколичеств

пестицидов в продуктах питания,

кормах и внешней среде, часть VI,

М., 1974

2. А.Б. Белова, Л.В. Новикова, Определение ДДТ, ГХЦГ, альдрина и

Н.И. Шадрина (ВНИИ жиров) гексахлорбензола в обогащенных и

необогащенных липидами хлопковых

шротах. Утвержд. 30.07.1973,

N 1112-73.

Там же

3. Э.И. Бабкина, Методические указания по контролю

Ц.И. Бобовникова, загрязнения почв. Утв. 12.10.1977,

В.В. Егоров, Г.В. Миронюк N 1766. Гидрометеоиздат, 1977

4. А.И. Шумкова, И.Н. Карпова, Определение хлорорганических

С.А. Ликунова, пестицидов в животных жирах, мясе,

Л.Д. Рузанкова (ВНИИМП) яйцах и продуктах их переработки

Н.В. Перетолчин, хроматографией в тонком слое.

Г.П. Угрюмова (ВНИИПП) Утв. 23.01.1975, N 1222-75.

Методические указания по

определению микроколичеств

пестицидов в продуктах питания,

кормах и внешней среде, часть VII,

1977

5. Л.Ф. Васьковская, Методы определения ДДТ, его

А.Л. Бурштейн (ВНИИГИНТОКС) метаболитов и ГХЦГ в табачных

изделиях способом хроматографии в

тонком слое. Утв. 22.09.1975,

N 1350-75.

Там же

6. В.Н. Полякова, Определение ДДТ, ДДД, ДДЭ и гамма-

Г.А. Трондина, Р.Д. Петухов изомера ГХЦГ в мясе, рыбе, органах

(ВИЭВ) и тканях животных, комбикормах,

меде и воде методом тонкослойной

хроматографии.

Справочная книга по ветеринарной

токсикологии, "Колос", 1976

С введением в действие настоящих Методических указаний считать утратившими силу "Методы определения гептахлора в растениях методом тонкослойной хроматографии" и "Метод определения ДДТ, ГХЦГ, альдрина и гексахлорбензола в хлопковых шротах, обогащенных и необогащенных липидами", утвержденные зам. Главного санитарного врача СССР в 1971, а также "Методическое письмо об определении ДДТ, гамма-ГХЦГ, ДДД, альдрина, гептахлора и некоторых других хлорорганических пестицидов в воде, продуктах питания и биологических средах методом хроматографии в тонком слое", утвержденное заместителем Главного санитарного врача СССР в 1968 г.